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Development of an orthogonal ligand-receptor pair based on synthetic estrogen analogs and engineered estrogen receptor for transcriptional regulation : = Entwicklung eines orthogonalen Liganden-Rezeptor-Paares auf der Basis von synthetischen Östrogen-Analoga und einem manipulierten Östrogen-Rezeptor zur transkriptionellen Regulation / vorgelegt von Kazi Mohammed Didarul Islam

The aim of this dissertation was the development of an inducible gene switch based on a modified human estrogen receptor and non-steroidal estradiol analogs. To that end, an in vivo test system in yeast has been used that allowed assessment of the transactivation properties of the artificial ligands... Full description

PPN (Catalogue-ID): 537579575
Nebentitel: Entwicklung eines orthogonalen Liganden-Rezeptor-Paares auf der Basis von synthetischen Östrogen-Analoga und einem manipulierten Östrogen-Rezeptor zur transkriptionellen Regulation
Personen: Islam, Kazi Mohammed Didarul
Format: eBook eBook
Language: English
Sprache der Zusammenfassung: Englisch
Published: 2007
Hochschule: Göttingen, Univ., Diss., 2007
Basisklassifikation: 42.00
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42.38
58.30
Formangabe: Hochschulschrift
Physical Description: Online Ressource (134 S., 2.550 KB), Ill., graph. Darst.

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520 |a The aim of this dissertation was the development of an inducible gene switch based on a modified human estrogen receptor and non-steroidal estradiol analogs. To that end, an in vivo test system in yeast has been used that allowed assessment of the transactivation properties of the artificial ligands in WT and mutated receptors. Using a systematic directed evolution approach based on identification of ligand contacting residues, saturation and finally random mutagenesis, a triple mutant (L384F L387M Y537S) was identified which showed altered induction kinetics with ligand CV3320. The mutant was 10-fold less active with natural ligand E2 whereas showed 160-fold increased activity with CV3320, leading to a 1.6x103 fold improvement. When the three exchanges were tested separately, the mutations were found non-additive but synergistic. In the WT-receptor only E2 is active but not the ligand CV3320. In the triple mutant the activity of E2 was dramatically decreased whereas the ligand CV3320 showed a significant increase in transactivation properties, thus creating a true orthogonal ligand-receptor combination. 
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